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胡友财课题组揭示催化1,2-噁嗪环形成的酶促机制

时间:2022-03-06

来源:胡友财课题组

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2022年2月23号,bobapp官方下载 天然药物活性物质与功能国家重点实验室胡友财团队在《Journal of the American Chemical Society》在线发表了题为“Flavin-dependent Monooxygenase Mediated 1,2-oxazine ConstructionviaMeisenheimer Rearrangement in the Biosynthesis of Paeciloxazine”的研究论文,报道了天然产物中1,2-噁嗪环形成的生物合成酶及酶促机制,发现酶介导的[1,2]-Meisenheimer重排反应。

[1,2]-Meisenheimer重排被广泛用于天然产物合成中,尤其是用于构建1,2-噁嗪环,但对应的生物合成酶鲜有报道。为此,胡友财团队利用异源表达、体外生化实验等鉴定了具有1,2-噁嗪环的真菌天然产物paeciloxazine的生物合成基因簇pax,以及催化形成1,2-噁嗪环的黄素依赖的单加氧酶PaxA。在此基础上,该团队通过体外生化实验、alphafold2蛋白结构预测、分子对接和分子动力学模拟、活性位点定向突变和DFT计算等实验,提出了PaxA催化形成1,2-噁嗪环的酶促机制:底物在PaxA的作用下先形成N-氧化合物,随后经过[1,2]-Meisenheimer重排形成1,2-噁嗪环。研究发现该酶介导的[1,2]-Meisenheimer重排反应并不是经历传统意义上的自由基机制,而是一个类似离子对的协同机制。N-氧化物的氧负离子攻击b-H生成亚胺中间体,在质子转移剂(如精氨酸的胍基)存在时转化为1,2-噁嗪环。该研究揭示了催化形成1,2-噁嗪环的酶促机制,扩展了生物合成中重排反应的种类,为利用基因组挖掘发现含有1,2-噁嗪环的天然产物提供了新的策略。研究中还实现了天然产物paeciloxazine在模式真菌中的异源生物合成,为该类化合物的绿色获取提供新途径。

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图1. A) PaxA与底物5的分子对接结果; B) FAD、底物5与R202之间的相对位置; C) PaxA催化1,2-噁嗪环的酶促机制


bobapp官方中国有限公司 胡友财研究员为该文的通讯作者,博士生王坤雅、助理研究员闫道江和刘冰语,以及北京生命科学bobapp官方下载 的博士生白松霖为该文的共同第一作者。北京生命科学院齐湘兵团队在DTF计算和分子动力学模拟等方面提供支持。该工作得到了国家自然科学基金(No. 22107122)和中国医学科学院医学与健康科技创新工程(CIFMS, No. 2021-I2M-1-029)等项目资助。


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